StarLighter Blood Direct PCR Mix 采用独特的 PCR 缓冲液体系，可高效降低血液中的抑制剂对扩增的影响，无需 DNA 纯化或样品处理，可以全血样本为模板进行直接 PCR。StarLighter Blood Direct PCR Mix 是 2 × 即用型 PCR 预混液，含有高效的 DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂和稳定剂，使用时只需加入模板、引物和水即可进行 PCR 扩增。本试剂盒适用于不同保存条件下的 EDTA 抗凝血样本，可用于单重或多重的血液直接扩增。
| 产品简介 StarLighter Probe qPCR Mix (High GC) 是一款适用于探针法 qPCR 的专用预混液。它含有优选的热启动 Taq DNA Polymerase，该酶与模板亲和力更强，再配合针对高 GC 靶标扩增优化的缓冲液，可以有效抑制非特异性扩增，大幅增加 qPCR 扩增效率和灵敏度。试剂盒可在较宽的浓度范围内得到良好的扩增曲线，对靶基因进行准确的定量、定性和 SNP 检测，具有重复性好，可信度高，兼容各种类型的 qPCR 探针的特点。参比染料 ROX 随试剂盒提供。 本产品是一款 2 × 预混液，只需额外加入引物、探针、模板，使用方便，同时兼容快速程序，缩短检测时间。 产品组分
注：请按照推荐的储存温度保存，避免反复冻融。 储存及运输条件 -25 ~ -15℃ 保存，< 0℃ 运输。 产品应用 基因表达分析； SNP 和等位基因分型； 测序和微阵列结果的验证； 注意事项
实验流程
 a. 反应体系可以在5 ~ 25 μL 范围调整（各组分按比例变化），不建议 >50 μL。b. 引物和探针反应终浓度可以在1 ~ 1 μM 之间调整。 c. 使用时共同组分最好先配成预混液。 d. ROX根据机型使用。 3. 盖好管盖，瞬时离心。 2. 反应程序 qPCR 标准程序
常见问题与解决方案
答：①如果扩增曲线不光滑，则需要重新校正系统，提高模板浓度，检查 ROX 是否使用错误。 ②如果扩增曲线出现断裂或下滑，则可能是模板浓度过高或基线选取范围不当导致，可以降低模板或重新设置基线。 ③如果个别扩增曲线骤降，则可能是反应管有气泡，所以上机前应先离心。
答：①可能是循环数不够：一般设 40 个循环，但过多循环数会增加背景信号，降低数据可信度。 ②确认程序中是否设置信号采集：两步法一般在退火/延伸阶段采集信号；三步法在延伸阶段采集信号。 ③引物降解：PAGE 检测排除其降解的可能性。 ④模板浓度太低：减少稀释度重复实验，先从高浓度做起。 ⑤模板降解：重新制备模板。
答：①扩增效率低：优化反应条件，尝试三步法扩增或重新设计合成引物。 ②模板浓度低：减少模板稀释度，先从高浓度做起。 ③模板降解：重新制备模板。 ④PCR 产物太长：推荐 PCR 产物长度 80 ~ 150 bp。 ⑤存在PCR抑制剂：若为模板带入，加大模板稀释倍数或重新制备模板。
答：①反应体系污染：更换新的试剂、水、引物等重复实验；在超净工作台内操作，减少气溶胶污染。 ②引物设计不合理：重新设计并合成引物。
答：①加样误差：提高模板稀释倍数，提高加样体积。 ②标准品降解：重新制备标准品。 ③模板浓度太高：提高模板稀释倍数。 6. 实验重复性差怎么办？答：①加样体积不一致：使用更好的移液器；将模板做高倍稀释，适当提高加样体积。 ②模板浓度太低：模板浓度越低，重复性越差，减少模板稀释度或提高加样体积。 |
||||||||||||||||||||
