产品优势
产品应用 高效去除10 ng~1000ng 古生菌total RNA样品的rRNA及Globin mRNA，在最大程度地回收其他mRNA和非编码RNA的同时，能够提高有效数据的比例，以用于后续全转录组测序、长链非编码RNA测序等相关领域的研究。 产品组分  保存说明 试剂盒放置2-8℃存储，探针-20℃保存。 ***杂交前，RNA 样本应保持冰上放置。 1. 将探针（Probe Mix）涡旋混匀，快速离心使管壁液滴收集到管底。 2. 探针、 RNA样品杂交体系配置： 将12 μL的RNA 样品加入PCR管或者PCR板中（包含10 ng-1000 ng 的total RNA,注：当用细菌、原核、真菌通用型rRNA去除试剂盒V1去除rRNA时，总RNA的input量不要超过 200 ng,推荐使用100 ng的总RNA进行rRNA去除处理；当用细菌、原核、真菌通用型rRNA去除试剂盒V2去rRNA时，总RNA的input量不要超过400ng,推荐使用200 ng的总RNA进行rRNA去除处理），如果样品体积> 12 μL，则相应调整HB的体积，使HB体积为总体积的0.25 ×。总反应体积不能超过40 μL。按下表进行体系配置：  *按照制造商的用量说明，确保酶在68℃时具有活性。在磁珠准备过程中也可以加入RNase制剂。3. 涡旋混匀并瞬时离心，收集管壁的液滴。 4. 将混合好的样本放PCR仪中进行杂交反应，杂交反应程序设置如下：  5. 准备链霉亲和素磁珠——SMB 5.1 涡旋振荡使链霉亲和素磁珠充分悬浮，不要离心，以防磁珠沉降。 5.2 每个样品取40 μL重悬好的磁珠到一个新的EP管中。对于多个样品所需SMB磁珠的清洗，可一起进行，如将6 个(240 μL)或12个样品(480 μL)的磁珠分装在一个管中进行清洗。 5.3 将管子放在磁力架上，静置直到溶液变清澈（此处因磁力架性能不同，时间会有差异，Thermo磁力架(货号：12321D，约2 min）。 5.4 去掉所有的上清液。 5.5 每个样品添加80 μL的DB (如6个样品添加480 μL ，12个样品添加960 μL) ，涡旋彻底混匀。 5.6 重复 5.3 到 5.5 步骤。 6. rRNA去除 6.1 将步骤 4中的杂交样品（~20 μL），瞬离后，每个样品加入 80 μL 准备好的链霉亲和素磁珠 (步骤5) ， 充分混匀。 6.2 室温孵育15 min，中间每5 min震荡混匀一次，随后放PCR仪上50℃孵育 5 min。  6.3 反应结束后立即将样品管放置磁力架上静置，直到溶液变清澈（此处因磁力架性能不同，时间会有差异，Thermo磁力架（货号：12321D，约2 min），小心将上清液转移至新的管中。 6.4 将样品放在磁力架上直到溶液变清澈，以去除微量残留的磁珠 (建议)。 6.5 小心地取96 μL 上清液转移到新的管中(建议)。 建议操作步骤 6.4 和 6.5 去除可能吸到的痕量磁珠，但非必须项。 此时， RNA可以在-20°C下保存一夜，或在-80°C下保存一个月。 ★安全停止点 7. RNA 纯化回收 rRNA去除后的RNA样本必须在文库制备之前进行纯化，以去除盐和缓冲液浓缩物。 7.1 添加 180 μL 的重悬好的纯化磁珠 (PB) （使用前室温平衡 30 min）到步骤6的样品中(~100 μL)，充分混匀。 7.2. 室温静置5 min。 7.3 将样品管放置磁力架上，静置3-5 min，直至溶液彻底变清。 7.4 去掉上清液。 7.5 样品管保持在磁力架上，加入200 μL新鲜配制的 80%乙醇（乙醇液面要覆盖磁珠，液面未能覆盖可多加80%乙醇），静置30 s。 7.6 去掉上清液，重复洗涤一次。 7.7 瞬离，去掉管底残余洗涤液。 7.8 将样品管放置磁力架上3-10 min，使磁珠自然晾干（注意不要使磁珠表面出现裂纹，避免过度晾干，过度晾干会影响RNA的回收率）。 7.9 将样品管从磁力架上取下，加入10-15 μL的RNase-free水，并重悬混匀。 7.10 室温孵育5 min。 7.11 将孵育好的样品管放置磁力架上，静置 2-5 min至溶液变清澈。 7.12 将含有RNA的上清液转移至一个新的管中。 7.13 此时，将RNA放置-80℃保存。 |
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