StarPure Plus Complex Plant total RNA Extraction Kit 适用于植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织(如棉花、成熟水稻、松针、杨树、枇杷、马铃薯、香蕉、葡萄、苹果、梨、月季、荞麦种子、拟南芥种子等)中快速提取总 RNA。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶，离心沉淀去除多糖多酚和次级代谢产物，然后裂解混合物用乙醇调节 RNA 结合吸附到基因组 DNA 清除柱，通过选择性洗脱将 RNA 洗脱下来，DNA 仍旧留在柱子上而被丢弃。洗下来的 RNA 用乙醇调节结合条件后，RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列漂洗－离心的步骤，将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的 RNase free H2O将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱，得到的 RNA 一般不需要 DNase 消化，可用于反转录 PCR、荧光定量 PCR 等实验。
StarPure Plus Complex Plant total RNA Extraction Kit
StarPure Plus 多糖多酚/复杂植物样本总 RNA 提取试剂盒
产品优势
产品应用 本试剂盒适用于植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织中快速提取总 RNA。得到的 RNA 可用于反转录 PCR、荧光定量 PCR 等实验。 产品组分  实验步骤 取1 mL裂解液 CLB 至离心管内(如果 CLB 有析出或者沉淀需先置于65℃水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入5% β-巯基乙醇（1mL CLB 加50 μL β-巯基乙醇）。颠倒混匀后65℃水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。 1.直接研磨法（实验室无液氮情况下或者柔软易研磨植物样品推荐此法）: a.新鲜或冰冻保存植物样本称重后取100mg-200 mg（水分少的样品如叶片、种子等可加100 mg-150 mg，水分多的样品如草莓、西瓜等可多加一些），迅速剪成小块放入研钵，加入 1mL CLB（已加有β-巯基乙醇）室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液 CLB 立刻充分接触以抑制 RNA 酶活性。✮注：β-巯基乙醇是裂解液 CLB 的关键成分，必要的时候可以提高终浓度到10-20%。 如果特别复杂植物，可以尝试在裂解液中加入 PVP 40至终浓度2%。 b.将裂解物转入离心管，立即剧烈振荡15秒，立即放回 65℃水浴中（5-10 min），中间颠倒混匀1-2次。13,000rpm离心10分钟，沉淀不能裂解的碎片。c.取裂解上清（在不超过gDNA 清除柱能力的情况下取尽量多的上清）转到一个新离心管。加入上清5倍体积无水乙醇，立即吹打混匀，不要离心。 若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。 d.立刻接操作步骤的步骤3。2.液氮研磨法（适用广泛，提取复杂难破碎，易降解样品时推荐此法）: a.液氮中研磨新鲜或-70℃冷冻的材料至细粉。b.转移100mg-200 mg细粉（水分少的样品如叶片种子等可加100 mg-150 mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些）加至预热的裂解液 CLB（已加有β-巯基乙醇）离心管中。立即剧烈涡旋30-60秒或者用吸头吹打混匀裂解直得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切 DNA ，降低粘稠度和提高产量。 c.立刻放回65℃水浴中（5-10min），中间颠倒混匀1-2次。 d.13,000 rpm离心10分钟，沉淀不能裂解的碎片。 e.将上清（在不超过gDNA 清除柱能力的情况下取尽量多的上清）转到一个新离心管。加入上清5倍体积无水乙醇，立即吹打混匀，不要离心。若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。 f.立刻接操作步骤的步骤3。 3.将混合物(每次小于720 μL，多可以分两次加入)转入一个 gDNA 清除柱（外套收集管）中，13,000 rpm离心2分钟，弃掉废液。 ✮注：确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。 4.将 gDNA 清除柱放在一个干净2 mL离心管内（不用 RNase free 或者 DEPC 处理，一般干净的新离心管即可。也可使用 RNA 吸附柱配套的新干净收集管），在 gDNA 清除柱内加500 μL RLT Lysis Buffer，13,000 rpm离心30秒，收集滤液（ RNA 在滤液中），精确估计滤过液体积（通常为450-500 μL左右，滤过时的损失体积应该减去），加入0.5倍体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。 5.立刻将混合物(每次小于720 μL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm离心2分钟，弃掉废液。 ✮注：确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。 6.加700 μL 去 Protein Wash Buffer，室温放置1分钟，13,000rpm 离心30秒，弃掉废液。 7.加入500μL Wash Buffer（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。重复洗涤一遍。 8.将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 9.取出吸附柱 RA ，放入一个 RNase free离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中间部位加30-50 μL RNase free water（在70-90 ℃水浴中预热）， 室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。 10.如果预期 RNA 产量>30 μg，加30-50μL RNase free water重复步骤9，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要 RNA 浓度高)。 ✮注：洗脱两遍的 RNA 洗脱液浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的 RNA 产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。
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