StarPure 胶回收试剂盒(膜柱法)

• 回收效率高
• 回收的DNA纯度好  

• PCR产物回收
• 酶切产物回收
• 其他琼脂糖凝胶电泳分离DNA的应用

由于电泳过程中DNA会有损失，为了测定不同厂家试剂盒的真实回收效率，我们分别切取100 mg干净的空白胶置于1.5 mL EP管中，
同时分别加入1000 ng 450bp的DNA片段，用不同厂家试剂盒分别进行溶胶以及后续的DNA回收流程（按照厂家各自说明书操作）。
启衡星膜柱法胶回收试剂盒的DNA回收率高于供应商A以及供应商B（Fig.1）。
                                               
                                                         
                                             Fig.1 不同厂家胶回收试剂盒DNA回收率表现

      以生工的DNA marker（B500351）做为样本，20 μL上样量，在 1% 凝胶中进行电泳分离，从琼脂糖凝胶中手动分别切出
5000 bp，1000 bp以及500 bp的DNA片段，分别使用 StarPure 胶回收试剂盒(膜柱法)回收，30 μL洗脱；每个片段的洗脱产物
（5 μL）和marker（3 μL）重新进行琼脂糖凝胶电泳，并比较结果。
         
                                                         
                                                  Fig.2 不同DNA片段的回收电泳图

注意事项：

1. 自备材料：离心机、水浴锅（或金属浴）、异丙醇、1.5 mL离心管和80%乙醇。
2. StarPure Gel Buffer A在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于37℃溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

3. 首次使用前请在StarPure Gel Washing Buffer C瓶中加入异丙醇（按照瓶身标签标示体积加入）并混匀。

4. 请提前将水浴锅（或金属浴）调至56℃备用。 

使用前请先向StarPure Gel Washing Buffer C中加入异丙醇（按照瓶身标识）。

1. 通过琼脂糖凝胶电泳将目的DNA片段与其它片段分开，用干净的手术刀片将含目的DNA的琼脂糖凝胶块切下，放入1.5 mL离心管中，称重（通常每条条带所切下的胶块在100 mg以内，请尽可能切除空白胶块） ；
2. 根据胶块的重量，按每100 mg琼脂糖胶块（如胶块不足100 mg依然按100 mg计算）加入 250 μL StarPure Gel Buffer A；
3. 将含有胶块的离心管置于56℃水浴5 分钟，至胶块完全溶化；
4. 取出离心管，平衡至室温，加入150 μL 异丙醇，震荡混匀；
5. 将步骤4得到的溶液加入到DNA吸附柱中（吸附柱置于收集管中），室温静置5-10分钟；
6. 12000 rpm 离心2min，倒掉收集管中的废液。
7. 加入600 μL StarPure Gel Washing Buffer C(使用前请确认加入等倍体积异丙醇)，震荡混匀，12000 rpm 离心2min，倒掉收集管中的废液。
8. 加入600 μL 80%乙醇，12000 rpm 离心2min，倒掉收集管中的废液。
9. 12000 rpm 离心2min，去掉残留的乙醇。
10. 将吸附柱置于一个新的收集管中，向吸附膜的中间部位加入50-100μL洗脱液（TE或去离子水），室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心2min，将质粒溶液收集到离心管中，将DNA-20℃保存或立即使用。