启衡星高灵敏探针法qPCR Mix篇之：宿主DNA残留检测解决方案

启衡星StarLighter高灵敏探针法qPCR Mix（货号：FS-Q3002）为宿主DNA残留检测提供解决方案。生物制品如重组蛋白药、抗体药、疫苗及细胞治疗产品在生产过程中，细胞培养阶段残留的宿主DNA可能带来感染风险、致癌性、免疫原性及其他毒性，监管机构制定了严格标准。《中国药典2020》列出的外源性DNA残留检测方法中，定量PCR法灵敏度、精确性和重复性更高。以人残留DNA检测为例，使用该qPCR Mix，以人基因组DNA不同长度片段为靶标，国家计量院标准品人gDNA为模板，不同模板量及试剂的Ct值显示启衡星产品性能优越，不受干扰基因组影响，重复性CV值＜15%，且多次冻融不影响检测结果，稳定性好。

May 12th,2022 635 浏览量

启衡星高灵敏探针法qPCR Mix篇之：宿主DNA残留检测解决方案

随着越来越多的生物制品（如重组蛋白药、抗体药、疫苗以及细胞治疗等产品）参与治疗疾病，对这一类的生物制品的质量控制也日益严格。生产该类生物制品的过程中的细胞培养阶段，由于DNA具有稳定性，在细胞培养过程中宿主细胞残留的DNA中可能存在感染风险或存在潜在的致癌性，免疫原性以及其他毒性，比如残留DNA可能携带HIV病毒或Ras癌基因。分布在哺乳动物细胞基因组的LINE-1序列可能发挥逆转录转座子作用插入到染色体中，这种插入可能影响关键基因功能的发挥，比如激活癌基因或抑制癌基因。此外，由于微生物来源的基因组DNA富含CpG和非甲基化序列，增加了重组蛋白药物在体内的免疫原性风险。为了保证生物制品的安全性，各监管机构（WHO，FDA，NMPA等）对参与治疗疾病的生物制品中的残留DNA制定了严格的标准。

关于外源性DNA残留检测方法，在《中国药典2020》中列出了三种方法，分别是DNA探针杂交法、荧光染色法，以及定量PCR法。相比于DNA探针杂交法和荧光染色法，定量PCR法具有更高的灵敏度，精确性以及重复性。启衡星生物针对极低模板检测而开发的StarLighter高灵敏探针法qPCR Mix（货号：FS-Q3002）可以为宿主核酸残留提供完美的解决方案。

｜应用案例一一人残留DNA qPCR检测｜

优异的性能表现

以人残留DNA检测为例，以人基因组DNA的某一段区域作为靶标，分别设计短（扩增片段<110bp）、中（110<扩增片段<250bp）、长（扩增片段>290）扩增片段的引物及探针，以国家计量院标准品人gDNA为模板（30pg/30fg的input量），再分别用不同厂家试剂进行qPCR定量检测。启衡星高灵敏探针法qPCR Mix比其他供应商试剂展现出更好的性能表现。

反应体系&反应程序如下：

扩增曲线图：

不同模板量及试剂的Ct值

启衡星高灵敏探针法qPCR Mix（蓝色曲线）无论是在荧光值强度还是Ct表现均优于其他供应商试剂的表现。

不同细胞系间无交叉影响，且重复性CV值＜15%

以国家计量院标准品人gDNA为模板，将gDNA分别稀释成300 pg/μl、30 pg/μl、300 fg/μl以及30 fg/μl；在30 μl反应体系中分别加入15 μl的2×StarLighter高灵敏探针法qPCR Mix，3 μl的引物和探针Mix（2.5 μM），10 μl上述稀释好的标准品，Rox 0.6 μl，同时分别加入3 ng的NS1，Ecoli（stb13菌株），酵母以及CHO干扰基因组DNA，用水补齐至30 μl，分别对短、中、长片段制作标准曲线；同时用300 pg/μl、3 pg/μl和30 fg/μl的标品作为未知样本分别对短、中、长片段进行定量检测。定量结果显示，标曲在线性、扩增效率以及R2都表现优异，同时不受干扰基因组的影响。同时对短、中、长片段不同浓度样品的定量准确，重复性CV值均小于15%。