• StarZol 总RNA提取试剂
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StarZol 总RNA提取试剂

No.FS-B2101-01/FS-B2101-02

StarZol 总 RNA 提取试剂是广谱型总 RNA 提取试剂,适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞、细菌等样品中提取 Total RNA。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。裂解充分,得率高,提取的总 RNA 完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。

货号/规格/价格:
FS-B2101-01/50 mL/¥260
FS-B2101-01/100 mL/¥480
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产品描述

StarZol Total RNA Extraction Reagent
StarZol 总 RNA 提取试剂  

产品优势
  • 本产品适用各类动物组织、植物材料、培养细胞、细菌等样品;
  • 在加入氯仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层红色有机相,RNA 分布在上清层中;
  • 一个小时内即可完成反应,且提取的RNA完整性和纯度有保证;
  • 本产品在室温下能稳定保存12个月,但保存在2~8°C的环境下,效果最佳,可达18个月。

产品应用

用于总RNA的提取,提取的总 RNA 完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。

产品组分


实验步骤

  1. 样本处理
    a.植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将其剪碎后直接在 StarZol中迅速研磨,每50-100 mg组织加入1 mL StarZol,混匀。
    ✮注:样品体积一般不要超过StarZol体积的10%。
    b.动物组织:取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎,每30-100 mg组织加入1mL StarZol,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入1 mL StarZol 混匀。
   ✮注:样品体积一般不要超过 StarZol 体积的10%。
    c.贴壁细胞:完全除去培养液后直接往直径5 cm 的培养板(约10 cm2)或常规6孔板每孔中加入1mL StarZol,覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的 StarZol 量。当 StarZol 量不足时可导致抽提的 RNA 中污染有 DNA。
    d.细胞悬液:离心收集细胞。加入 StarZol 试剂后反复吹吸来裂解细胞。每5-10×106的动物细胞,植物细胞或每1×107细菌加1 mL StarZol。在加入StarZol 前应避免洗涤细胞,否则会导致 mRNA 降解。破裂某些酵母或细菌可能需要使用匀浆器。
  1. 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟使核蛋白体完全解离。
  2. 可选步骤:在4℃的条件下以12,000rpm的离心力离心10分钟,取上清。

如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时,上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。

  1. 每1mL StarZol 加2 mL氯仿。盖紧管盖,剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2~3分钟。
  2. 在4℃ 12,000rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层:下层红色有机苯酚,中间层和上层无色的水相。RNA存在于水样层中。水样层的容量大约为所加 StarZol 容量的50-60%。(有机层和中间层是蛋白和DNA)。
  3. 将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。

RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。

  1. 在室温或者4℃ 12,000rpm 离心10分钟,弃上清。
  2. 加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1mL StarZol 用1 mL 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
  3. 室温或者4℃ 12,000rpm离心3分钟,弃上清,注意不要丢失RNA沉淀。

:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。

  1. 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟使核蛋白体完全解离。
  2. 可选步骤:4℃的条件下以12,000rpm离心10分钟,取上清。

如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量 DNA,上清中含有 RNA。处理脂肪组织的样品时,上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。

  1. 每1mL StarZol 加2 mL氯仿。盖紧管盖,剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2~3分钟。
  2. 在4℃12,000 rpm高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层:下层红色有机苯酚,中间层和上层无色的水相。RNA存在于水样层中。水样层的容量大约为所加 StarZol 容量的50-60%。(有机层和中间层是蛋白和DNA)。
  3. 将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。

RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。

  1. 在室温或者4℃12,000 rpm 离心10分钟,弃上清。
  2. 加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1mL StarZol用1 mL 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
  3. 室温或者4℃ 12,000rpm离心3分钟,弃上清,注意不要丢失 RNA 沉淀。

:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。

  1. 室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μL RNase free water,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。

:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。


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