StarLighter Script III First Strand cDNA Synthesis Kit

发布日期：2023-05-16 返回列表

（StarLighter Script III 第一链cDNA合成试剂盒）

产品简介

本试剂盒采用最新一代逆转录酶（第四代基因工程改造酶）研制的一管式逆转录 Mix, 包含了逆转录所需的逆转录酶、随机引物、Oligo dT 等反应组分，可在体系中直接加入 RNA 模板即可进行逆转录反应。最新一代的逆转录酶耐受高温，可在 42°C-65°C 温度下表现出良好的逆转录活性，能有效逆转录复杂结构的 RNA。

产品优势

1. 耐高温、有效逆转录结构复杂的 RNA 模板；

2. 逆转录效率高，准确反映模板信息；

3. 兼容高 GC/AT 模板以及降解样本，操作简单。

产品应用

1. 基因表达分析；

2. RNA 病毒检测；

3. 极低拷贝基因检测。

产品性能

1、逆转录结果准确反映模板量信息

以 RNA 起始量为 0.2 ng-2000 ng 进行反转录，用 qPCR 进行定量，反转录模板量对应的 log 值与 qPCR Ct 值之间有很好的线性关系。

Fig.1 不同试剂逆转录的产物 qPCR 结果比较。以起始量 0.2 ng-2000 ng 的人 Hela 细胞系 RNA（已去除DNA) 为模板进行逆转录，取 1/10 体积逆转录产物作为定量模板，并用启衡星 Starlighter SYBR Green qPCR Mix 进行定量实验（YWHAZ 引物，产物 249 bp，产物 GC 含量44.6%），以逆转录模板对应的 log 值与 qPCR Ct 值进行作图，启衡星以及供应商 TA2、AB-III 表现出非常好的线性关系，且扩增效率在95-110％之间。

2、逆转录效率高

GC 含量为 60-75%，启衡星逆转录试剂和 AB-III 在 4 ng-2000 ng 范围内均表现出很好的逆转录效率。

Fig.2 不同试剂的逆转录效率比较。将 1000 ng RNA input 的逆转录效率设为 100%，根据试验结果计算各试剂盒自身在不同起始量时的相对逆转录效率。

3、轻松应对高 GC 模板的逆转录及定量

对于 GC 含量为 75.5％基因（人 ApoE)逆转录及定量，启衡星逆转录试剂盒获得极好的 input 及 output 线性关系， R2=1。

Fig.3 用不同试剂逆转录的产物进行 qPCR 定量，比较高 GC 片段定量结果。以不同起始量的人 Hela 细胞系 RNA（已去除DNA) 为模板进行逆转录，取 1/10 体积逆转录产物作为定量模板，并用启衡星 StarLighter SYBR Green qPCR Mix 进行定量实验(ApoE 引物，产物 322 bp, 产物GC 含量 75.5%)，比较不同逆转录试剂的逆转录 RNA 量与 qPCR Ct 值间的线性关系。

4、轻松应对降解、低起始量样本

反转录模板起始量（ng）	RIN 值	引物HMBS		引物YWHAZ
20	2	30.18	Eff%=95.6，R²=1.000	24.64	EFF%=97.5，R²=0.999
2		33.61		28.20
0.2		Undetermined		31.41
20	4	28.93	Eff%=103.6，R²=0.998	23.93	EFF%=93.9，R²=0.999
2		32.45		27.60
0.2		35.41		30.89
20	6	28.81	Eff%=106.4，R²=0.991	23.91	EFF%=95.7，R²=0.998
2		32.51		27.61
0.2		35.17		30.77
20	8	28.89	Eff%=103.4，R²=0.993	23.75	EFF%=95.5，R²=1.000
2		32.60		27.50
0.2		35.38		30.62

Tab.1 StarLighter Script RT all-in-one Mix 逆转录不同完整性的 RNA 模板，逆转录产物定量结果展示。以不同降解程度的 RNA 为模板，连续梯度稀释 (20-0.2 ng) 为模板进行反转录，取 1/10 体积逆转录产物作为定量模板，并用启衡星 StarLighter SYBR Green qPCR Mix 进行定量实验。启衡星逆转录试剂盒均能有效逆转录，且模板量 Log 值与 Ct 值之间表现出极好的线性关系，扩增效率在 90-110％之间。

5、兼容多种类型样本

与供应商 TA2、TS 相比，启衡星逆转录试剂盒在各种不同样本中均表现出良好性能，Ct 值更低。