SYBR qPCR Mix、Probe qPCR Mix, RT-PCR、PCR、 ...
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StarLighter SYBR Green qPCR Mix (Universal)
StarLighter SYBR Green qPCR 预混液(通用型)
产品简述:
StarLighter SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料,反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料,能够降低荧光信号达到阈值的循环数(Ct值),提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强,能有效减少非特异性扩增,数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板,能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。
主要应用:
基因表达分析;
低拷贝数基因检测;
基因敲除验证;
基因表达验证;
RNA拷贝数检测(病毒及病菌等检测)。
技术特点:
扩增特异性强,数据结果可靠;
反应效率高,Ct值提前;
信噪比高,灵敏度高;
高GC或高AT的片段扩增效果好;
耐受抑制剂能力强。
优异表现:
(1)扩增特异性强,数据结果可靠
与众多国内外品牌qPCR Mix相比,启衡星SYBR Green qPCR Mix表现出超好的性能。
Fig.1 不同试剂的 qPCR 结果准确性比较。以人的 cDNA为模板,使用同厂家试剂,扩增长度为 219 bp 的片段,GC%=64% (TR基因)。分别得到 StarLighter SYBR Green qPCR Mix与各品牌的扩增和熔解曲线图;SL—StarLighter SYBR Green qPCR Mix,使用此试剂得到非常完美的扩增 曲线,荧光信号强,溶解曲线及电泳条带单一 、准确。
(2)扩增效率高,线性范围好, 低拷贝检测灵敏度高
(3)荧光信号强,灵敏度高
(4)Ct 值出现更早
Fig.4 不同试剂qPCR结果的Ct值比较。 以人DNA为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为219 bp的片段,GC%=64% (TR基因); 在产物经电泳 验证为目的片段的前提下,扩增曲线去掉Rox校正后,StarLighter SYBR Green qPCR Mix Ct值最小,灵敏度最高。
为qPCR反应后产物的电泳图。
(5)高GC或高AT的片段扩增效果好
Fig.5 不同试剂定量高AT片段的结果比较。以人的DNA为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为198 bp的片段, AT%=64.4% (hPRTl基因); 从扩增效率上看,StarLighter SYBR Green qPCR Mix,Eff=l00.868%为最优;友商TY3,Eff=94.630%;友商KP,Eff=98.334%。
Fig.6 不同试剂定量高GC片段的结果比较。以人的DNA为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为322 bp的片段,GC%=75.5% (ApoE基因); 从扩增效率上看,StarLighter SYBR Green qPCR Mix,Eff=101.307%为最优; 友商TY3,Eff=150.097%;友商RC,Eff= NA(最高浓度无扩 增)。
(6)耐受抑制剂能力强
(7)试剂稳定易保存
4℃保存稳定性
常温与37°C保存稳定性
反复冻融
Fig.8 StarLighter SYBR Green qPCR Mix稳定性测试的结果展示。 图A:试剂4℃保存至39天; 图B :试剂室温保存至8天; 图C :试剂31℃保存至 8天;图D:试剂反复冻融至35次;以人的DNA为模板,扩增长度为123 bp的片段(UBC基因),GC%=52%,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。
Primer
竞品 | ApoE(人,DNA,amplicon length=322bp, GC%=75%) | TR(人,DNA,amplicon length=219bp, GC%=64.0%) | UBC(人,cDNA,amplicon length=123bp, GC%=52.0%) | |||
特异产物 | 扩增效率 | 特异产物 | 扩增效率 | 特异产物 | 扩增效率 | |
TG | √ | 149.631% | √ | 96.795% | ||
TK | √ | 102.101% | ||||
VZ | √ | 97.196% | ||||
AB | √ | 98.789% | ||||
TY3 | √ | 98.028% | √ | 110.361% | ||
KA | √ | 108.63% | ||||
SL | √ | 105.049% | √ | 95.998% | √ | 100.374% |
YS | √ | 99.905% | ||||
CW | ||||||
BR | √ | 95.611% | ||||
RC | √ | 92.762% | √ | 97.752% | ||
TY1 | √ | 96.83% |
定量反应(体系、程序参数)
(1)推荐反应体系
组分 | 10 µl /rxn | 20 µl /rxn | 终浓度 |
H2O(PCR级) | 补至10µl | 补至20µl | N/A |
2× SYBR qPCR Ready Mix | 5μl | 10μl | 1x |
10 µM 正向引物 | 0.3 μl | 0.6 μl | 300 nM |
10 µM 反向引物 | 0.3 μl | 0.6 μl | 300 nM |
cDNA模板 | (<50ng/μl) | (<50ng/μl) | 根据需要 |
RoX | 0.2μl | 0.4μl | 50/500nM(根据仪器需要) |
(2)推荐反应程序
步骤 | 温度 | 时间 | 循环 |
酶激活 | 95℃ | 5 min | |
变性 | 95℃ | 30 sec | 40 cycles |
退火/延伸 数据采集 | 60℃ | ≥20 sec(根据仪器和扩增产物长度;若采用三步法,20sec退火后,72℃延伸1sec) | |
熔解曲线 | 根据仪器要求 |
说明书附件下载:
FS-Q1001 StarLighter SYBR Green qPCR Mix(Universal)-说明书.pdf
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